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Haematoxylum campechianum L., conocido como palo de Campeche o palo de tinte y entre los pobladores mayas como éek, tooso boon che’ o palo, con alto valor comercial se encuentra creciendo como planta silvestre en la Península de Yucatán, esta especie es un taxón distribuido en la región, con valor con histórico, patrimonial y económico, debido a su comercialización como materia prima para extraer tinturas naturales. Los objetivos de esta investigación fueron determinar la morfometría, viabilidad y germinación de semillas de palo de tinte en campeche en función de la temperatura y periodo de almacenamiento, con la finalidad de incrementar su potencial de aprovechamiento forestal. Se recolectaron semillas en el municipio de Escárcega, Campeche, en el mes de marzo del año 2024. Se realizaron pruebas de germinación y viabilidad (prueba de tetrazolio) cada 30 días durante ocho meses, a diferentes temperaturas (-18 °C, 3 °C, 23 °C y temperatura ambiente ≈ de 31 °C). Se encontraron diferencias significativas (p < 0.05) del porcentaje de germinación (% G) de acuerdo con el tiempo de almacenamiento, donde el mayor porcentaje de germinación (90%) fue en la temperatura de 3 °C. La viabilidad se mantuvo durante 180 días, después fue disminuyendo gradualmente, por las características encontradas se infiere que las semillas de H. campechianum se clasifican como intermedias.
Haematoxylum campechianum L., fisiología, forestal, semilla.
México ocupa el séptimo lugar entre los países con las tasas más altas de deforestación en el mundo, siendo las regiones tropicales del país las que sufren el mayor daño ambiental debido a diferentes actividades humanas (FAO, 2025).
Los bosques tropicales están mejores representados en el sureste del país en dónde existen sitios privilegiados, como los estados de Chiapas, Tabasco y Campeche que cuentan con múltiples factores como son: la precipitación, luz, temperatura, suelos, topografía, entre otros, que al interactuar determinan la distribución de la vegetación (SEMARNAT, 2017).
H. campechianum es un árbol silvestre de la Península de Yucatán de la familia Fabaceae, se encuentra en tierras bajas, con suelos arcillosos y profundos con escaso drenaje (Niembro, 2002), en los que se desarrolla selva baja inundable conocida como Ak’alche en la terminología maya (Chable-Vega et al., 2019).
Con frecuencia H. campechianum forma agrupaciones densas conocidas como tíntales. Debido a su amplia plasticidad ecológica, logra adaptarse a diferentes ambientes y crece asociado a selva alta subperennifolia, selva mediana subcaducifolia y subperennifolia, manglares, matorrales, orilla de ríos u otros cuerpos de agua y en vegetación secundaria (Pennington y Sarukhán, 1998; Niembro, 2002).
Este taxón, con valor histórico, patrimonial y económico, debido a su comercialización como materia prima para extraer la hematoxilina, un tinte natural (Contreras, 2010), que se utiliza en aplicaciones citológicas para teñir la cromatina uniéndose a componentes ácidos como los grupos fosfatos del ADN nuclear, se le atribuyen también propiedades antiinflamatorias, antioxidantes, antisépticas y anticancerígenas (Duke, 2008).
Así mismo se sigue usando como tinte natural de fibras textiles y en el área artesanal para teñir ropa, hamacas y sombreros de jipijapa, por la dureza de su madera se utiliza también en postes de cercas y la elaboración de carbón (Peng et al., 2014; Plasencia et al., 2017).
Actualmente muchos tíntales están sufriendo una reducción significativa asociado con actividades antropogénicas en su hábitat, cómo son: la destrucción, degradación y fragmentación de ecosistemas, principalmente debido a la expansión agrícola, la urbanización y la tala ilegal (Vester et al., 2007).
La deforestación en los sitios donde se localizan los tíntales apunta a un riesgo inminente de sus poblaciones, con el peligro que esto significa para toda la diversidad de flora y fauna asociada (Plascencia-Vázquez et al., 2025).
Por lo anterior, y el valor que representa el palo de tinte desde el punto de vista económico y para la diversidad es determinante implementar programas de reforestación y conservación. Aunque la investigación sobre los procesos de germinación de semillas de H. campechianum es escasa, es necesario el conocimiento de su calidad física y fisiológica después de ser cosechadas, y como cambia se modifica a través del tiempo de almacenamiento esto con la finalidad de desarrollar un plan de manejo adecuado para su conservación.
Con base a las respuestas a la desecación, las semillas se dividen principalmente en dos categorías: semillas ortodoxas (tolerantes a la desecación) y recalcitrantes (sensibles a la desecación) (Roberts, 1973). Las semillas ortodoxas pueden ser almacenadas después de su deshidratación bajo un amplio rango de condiciones ambientales; pero las semillas recalcitrantes no toleran la deshidratación y por consiguiente, se hace muy difícil su conservación por métodos tradicionales en bancos de germoplasmas (Ellis et al., 2007).
Existe un tercer grupo de semillas que se reconocen como intermedias, como su nombre lo indica, su comportamiento es intermedio entre las recalcitrantes y las ortodoxas (Hong y Ellis, 1996), pero son tolerantes a la desecación.
La calidad fisiológica de una semilla influye en la suma de todas las características que determinan su comportamiento y el posible nivel del desarrollo del cultivo; en los componentes de calidad de la semilla influyen aspectos genéticos, físicos, fisiológicos y de salud (microrganismos e insectos) (Velázquez, 2014; ISTA, 2024).
Por lo anterior, el objetivo de esta investigación fue determinar la viabilidad y germinación de semillas de H. campechianum en función de temperatura y periodo de almacenamiento, con la finalidad de determinar la temperatura y el tiempo máximo de almacenamiento que garanticen altos porcentajes de germinación.
Las semillas de H. campechianum fueron colectadas el 21 de marzo del 2024, en el municipio de Escárcega, Campeche con coordenadas: 18.4221259, -90.7944725; 18.4249464, -90. 7884012 (Figura 1), el clima es cálido-subhúmedo con lluvias en verano, la temperatura media anual es de 26 °C y la precipitación anual de 1 100-1 200 mm (García, 2004).
La colecta se realizó de acuerdo con la metodología de Vallejos et al. (2010), las semillas se obtuvieron directamente de la copa de 20 árboles y se almacenaron en costales de henequén, con la finalidad de evitar la acumulación de humedad y con ella la presencia de hongos enseguida se transportaron para su procesamiento, al laboratorio de ecofisiología de cultivos tropicales del Tecnológico Nacional de México, Campus Chiná, ubicado en el estado de Campeche, México (19° 45’ 37” N; 90° 29’ 46” O), con una altitud sobre el nivel del mar de 20 m y un clima predominante tipo cálido subhúmedo con lluvias en verano de junio a octubre, temperatura anual promedio de 26 ºC y precipitación que varía entre 1 100 mm y 2 000 mm (García, 2004).
Se utilizaron semillas sanas, enteras y uniformes. Se seleccionaron aleatoriamente cuatro grupos de 20 semillas y las variables que fueron cuantificadas fueron: largo (mm) y ancho (mm) de la semilla con ayuda de un calibrador digital (vernier digital Truper® modelo CAL-6MP) (Figura 2).
Parámetros físicos y fisiológicos de semillas al inicio del estudio. Los parámetros físicos de calidad de la semilla se determinaron al inicio del estudio, un día después de ser colectadas, previo al almacenamiento y fueron los siguientes: peso de 100 semillas, pureza, contenido de humedad, porcentaje de viabilidad de semilla mediante la prueba topográfica por tetrazolio y porcentaje de germinación mediante la prueba de papel. Se utilizó un tamaño de muestra homogéneo según lo especificado en las reglas de la Asociación Internacional de Prueba de Semillas (ISTA, 2024), 100 semillas para cada prueba con tres repeticiones.
Peso de 100 semillas. Se realizó el pesaje de 100 semillas con tres repeticiones, con una balanza digital de precisión de 0.001 g (OHAUS Adventurer®). Con los datos obtenidos se determinó el número de semillas por kilogramo (ISTA, 2024): número de semillas por kg= (número de semillas de la muestra/peso de la muestra (g)*1 000).
Pureza física. La semilla se considera pura si aparece normal en cuanto a su tamaño, forma y aspecto general externo. Inversamente, se considera como impura la semilla que es demasiado pequeña, que ha sido parcialmente comida por los insectos o pone en evidencia manchas producidas por los hongos. Se determinó mediante la separación de una muestra representativa en tres componentes principales: semilla pura, otras semillas y materia inerte. A continuación, se pesaron las semillas puras. Se cuantificó el porcentaje de pureza con la siguiente fórmula (ISTA, 2024): % de pureza= (peso de semillas limpias/peso de la muestra)*100.
Contenido de humedad. Se empleó el método de secado en estufa, se usaron tres repeticiones de 100 semillas. Las semillas fueron colocadas en sobres de papel estraza para después introducirlas en la estufa de secado (Thermo Scientifics®) a 95 °C por 72 horas, después del periodo de secado, con ayuda de la balanza digital se tomó el peso de materia seca. Para cuantificar el contenido de humedad se aplicó la siguiente fórmula (ISTA, 2024): contenido de humedad (%)= [(peso fresco-peso anhidro)/peso fresco]*100.
Prueba de viabilidad inicial. La viabilidad de las semillas se determinó con la técnica de tetrazolio, de acuerdo con la normatividad internacional del ISTA (2024) y consistió en la inmersión de las semillas en una solución de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio al 1% por un periodo de 8 h a temperatura ambiente y ausencia de luz. Previamente se realizó un corte transversal de la semilla con un bisturí y de esta manera facilitar la penetración de la solución. Posteriormente se eliminó el exceso de la solución y se evaluó la viabilidad con ayuda de un estereoscopio (10x).
La viabilidad de las semillas se determinó según la coloración del embrión: semillas totalmente teñidas (embriones viables y vigorosos), semillas parcialmente teñidas (embriones viables con medio vigor) y semillas no teñidas (embriones no viables) (Rao et al., 2007). Se evaluaron tres repeticiones de 20 semillas, se determinó al inicio del experimento una vez colectadas las semillas. La viabilidad se determinó con la siguiente expresión: % de viabilidad= número de semillas teñidas/número total de semillas.
Germinación inicial. Una prueba de germinación se realiza para determinar qué proporción de las semillas de una accesión germinará en condiciones favorables y producirá plántulas normales (plántulas con estructuras esenciales: raíces, brotes y suficiente reserva de alimento, capaces de desarrollarse en plantas reproductivamente maduras) (Rao et al., 2007). La germinación inicial, se determinó en semillas recientemente colectadas, de acuerdo con las Reglas de Análisis de Semillas (ISTA, 2024), utilizándose cuatro repeticiones de 100 semillas a través del método de germinación en papel y fue expresada en porcentaje de plantas normales (%), con la siguiente fórmula (ISTA, 2024): % de germinación= número de semillas germinadas/número de semillas sembradas*100.
Se evaluaron cuatro ambientes de almacenamiento de semilla que consistió en cuatro temperaturas: 31 °C a temperatura ambiente, 23 °C en un cuarto de incubación, 3 °C en un cuarto frío y -18 °C, en un congelador (Samsung®). Se utilizaron sensores HOBO H8-032-08 (Onset Computer Corporation, USA), para registrar la temperatura y humedad relativa en los ambientes de almacenamiento. Las temperaturas fueron definidas en función de estudios en otras especies de árboles tropicales (Santillán-Fernández et al., 2023).
Para analizar el efecto de la temperatura (31 °C, 23, 3, -18 °C) en un periodo de almacenamiento de 240 días (ocho meses), se estableció un diseño completamente al azar con tres repeticiones de 20 semillas por temperatura de almacenamiento, la evaluación se realizó cada 30 días.
La viabilidad de las semillas se determinó con la técnica de tetrazolio, de acuerdo con la normatividad internacional del ISTA (2024) y consistió en la inmersión de las semillas en una solución de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio al 1% por un periodo de 8 h a temperatura ambiente y ausencia de luz. Posteriormente, se eliminó el exceso de la solución y se evaluó la viabilidad con ayuda de un estereoscopio (10x).
De acuerdo con el sistema de clasificación de Pérez-Mendoza (2018), se consideraron tres categorías: clase 1) semillas con tinción total y uniforme (embriones viables y vigorosos); clase 2) semillas no teñidas (embriones no viables); y clase 3) semillas parcialmente teñidas (semillas dudosas, 50% de tinción, embriones parcialmente viables).
Se evaluó el porcentaje de germinación de semillas en función de la temperatura y periodo de almacenamiento, a través de la prueba de germinación en papel en cuatro repeticiones de 100 semillas por cada temperatura. Fueron distribuidas uniformemente sobre una capa de papel (estraza) previamente humedecidas, los cuales se colocaron en cajas de plástico.
Se realizó el primer conteo a los cinco días de haber montado la muestra en las bandejas para obtener el número de semillas germinadas, y a partir de este indicador contando con un periodo de siete días. Se consideró germinada la semilla cuando la radícula presentó una longitud de 0.5 mm aproximadamente (Vadillo et al., 2004).
Los datos se sometieron a un análisis de varianza con el procedimiento PROC GLM de SAS 9.2® (SAS Institute Inc., 2009) y comparación de medias con la prueba de Tukey (p ≤ 0.05). En todos los casos se comprobó el supuesto de normalidad, así como la homogeneidad de varianzas por medio de la prueba Shapiro-Wilk y Levene, respectivamente (Contreras-Cruz, 2023).
Los resultados del análisis morfométrico de semillas indican que tienen características transversales oblongas, planas lateralmente, con una longitud de semillas de 1 a 3 cm de largo, 1 a 2 cm de ancho y 0.7 a 1 mm de grosor (Figura 2). La descripción aquí encontrada coincide con la reportada por Niembro (2002), con una cubierta seminal ligeramente parda, suave, opaca, coriácea, y marcada en su superficie lateral por una línea verde-grisácea o depresión longuitudinal sinuosa y profunda.
Parámetros físicos y fisiológicos de semillas al inicio del estudio. Se determinaron las pruebas iniciales de calidad encontrándose los siguientes resultados: un peso de 5.899 g en 100 semillas, pureza de 98.6%, contenido de humedad de 6.15%, viabilidad de 95%, semillas por kg de 16 952 y porcentaje de germinación de 97.7% (Cuadro 1).
| Peso de 100 semillas (g) | Pureza de semillas (%) | Contenido de humedad (%) | Viabilidad (%) | Semillas por kg | Germinación (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| 5.899 | 98.6 | 6.15 | 95 | 16 952 | 97.7 |
Se encontró un 98.6% de pureza debido a que la colecta de las semillas fue directamente de la copa de los árboles, por lo que no se presentó basura u otros materiales ajenos a la semilla. Un almacenamiento de semillas bajo condiciones adversas ocasiona el envejecimiento provocando la obtención de materiales con una reducida capacidad de germinación (Magdaleno-Hernández et al., 2020).
El contenido de humedad de las semillas fue de 6.15%, este valor nos indica que las semillas pueden almacenarse por varios meses y garantiza su calidad, lo contrario un contenido de humedad del 20% no es adecuado para su almacenamiento ya que el tiempo de almacenamiento de las semillas disminuye conforme aumenta el contenido de humedad de estas (Hay et al., 2023).
Las semillas con mayor calidad se observaron en la temperatura de almacenamiento de 3 ºC. Se observaron semillas con tinción total y uniforme, semillas sin tinción y semillas teñidas parcialmente (Figura 3). La tinción de color rojo de los embriones indica la viabilidad de las semillas, resultado de la actividad respiratoria de las mitocondrias mostrando viabilidad celular (Busso et al., 2015).
Estos patrones han sido reportados en otras especies como Cedrela odorata L., Cariniana pyriformis Miers (Espitia-Camacho et al., 2017), Coffea arabica L. (Flechas-Bejarano y Medina-Rivera, 2021), Roseodendron donnell-smithii (Agustín-Sandoval et al., 2017). Para las condiciones de almacenamiento (a diferentes temperaturas) en intervalos de 30 días, se observó una disminución gradual de la viabilidad de las semillas para las temperaturas de 31 °C y -18 °C, a partir de los 60 días de almacenamiento se observó un 65% de viabilidad; por el contrario, la temperatura de 3 ºC fue la mejor para el almacenamiento de semillas, conservándose un porcentaje de viabilidad a los 180 días de 85%.
Para la temperatura de 23 °C, se observó que la viabilidad disminuyó a 60% a partir de los 120 días de almacenamiento (Figura 4). En la familia Fabaceae se han realizado pocos estudios para conocer la tolerancia a la desecación, Galíndez et al. (2015) identificaron el efecto del almacenamiento en dos especies subtropicales de Fabaceae, Amburana cearensis (Allemao) AC Sm y Myroxylon peruiferum Lf, observando que las semillas de A. cearensis almacenadas a -18 °C en un periodo de doce meses se clasificaron como ortodoxas, mientras que las de M. peruiferum fueron sensibles a la desecación y al almacenamiento a -18 °C.
Los análisis estadísticos indicaron que existen diferencias significativas entre condiciones de almacenamiento (31 °C, 23 °C, 3 °C, y -18 °C) en los diferentes tiempos de almacenamiento de semillas (p < 0.001); entre 30 a 240 días (Figura 5). El mayor porcentaje de germinación 90% a los 150 días de almacenamiento fue a 3 °C, por el contrario, las temperaturas que más afectaron la germinación fueron a 31 °C y -18 °C.
Euan-Tun et al. (2021) reportaron valores de 55 y 54% de germinación después de un almacenamiento de 10 meses; sin embargo, a diferencia de este estudio (temperatura controlada) en dicho trabajo sólo evaluaron una temperatura de almacenamiento de 25 ºC.
Se ha reportado que a temperaturas de -18 °C, la germinación de semillas en fabáceas (leguminosas) es limitante, esta temperatura de congelación detiene la actividad metabólica y química necesaria para iniciar dicho proceso, lo que ocasiona que la semilla se mantiene en un estado de latencia y en casos extremos la muerte del embrión (Portuguez et al., 2020).
De la misma manera temperaturas extremas (mayores a 30 °C), resulta en la termoinhibición en la germinación, lo cual está íntimamente ligado a la reducción en la síntesis de proteínas en el embrión, inhibición de la transcripción, aumento de la síntesis de ácido abscísico relacionado con la latencia (Ding et al., 2008). Por el contrario, se observó una respuesta positiva a la temperatura de 3 ºC, esto confirma a menor temperatura es mayor es la longevidad de la semilla de palo de tinto, mientras que las temperaturas cálidas aceleran su deterioro y pérdida de capacidad germinativa (Santillán-Fernández et al., 2023).
La temperatura y el tiempo de almacenamiento son factores que afectan la viabilidad y germinación de semillas de palo de tinto, derivado de este estudio podemos clasificar a estas semillas como intermedias. La información generada es valiosa dado que existe poca o nula información sobre la calidad física y fisiológica de semillas de H. campechianum en función de la temperatura y periodo de almacenamiento, así como para desarrollar estrategias de conservación de estas especies. Es necesario enriquecer estos resultados con otros experimentos, incluyendo diferentes tipos de sitios de colecta, así como otros parámetros de calidad física y fisiológica.
Agustín-Sandoval, W. G.; Espinosa-Zaragoza, S.; Avendaño-Arrazate, C. H.; Reyes-Reyes, A. L.; Ramírez-González, S. I.; López-Báez, O.; Andrade-Rodríguez, M. y Rangel-Zaragoza, J. L. 2017. Calidad de semillas de primavera (Roseodendron donnell-smithii Miranda syn Tabebuia donnell-smithii Rose). Agroproductividad. 10(3):81-86. https://revista-agroproductividad.org/index.php/agroproductividad/article/view/974.
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