Comparación de protocolos de aislamiento de DNA a partir de semilla de soya

Resumen

La baja eficiencia de algunos protocolos de extracción de ácidos nucleicos y el alto costo de los productos comerciales, deriva en la comparación entre métodos. En el presente trabajo se compararon tres métodos de extracción de DNA a partir de semilla de soya, para obtener ácidos nucleicos de concentración y calidad adecuadas para amplificación por PCR. Los protocolos estudiados incluyeron los métodos con soluciones de CTAB al 1% y al 3%, con sarcosina al 1% y con fenol/cloroformo. Los experimentos se realizaron en el laboratorio de ADN y Genómicas del Centro Nacional de Recursos Genéticos-INIFAP. Se evaluaron el rendimiento, pureza, integridad y funcionalidad de los ácidos nucleicos obtenidos. En todos los métodos se consiguió rendimiento adecuado de DNA, sin embargo, la pureza requerida del material solo se obtuvo con la solución de fenol/cloroformo. Con los métodos de CTAB al 1% y 3% y sarcosina se observaron sustancias contaminantes inhibidoras de PCR, mientras que, con fenol/cloroformo los valores de la relación A260/280 estuvieron en un rango de 1.96 a 2.00 y la relación A260/230 en un rango de 1.75 a 2.44, con diferencias significativas (p< 0.0001) con el resto de los métodos, además, el DNA fue de alto peso molecular y se obtuvo amplificado del gen rbcL por PCR en todas las muestras. El uso del protocolo de fenol/cloroformo permitió obtener de semilla de soya, ácidos nucleicos de concentración y calidad adecuadas para amplificación por PCR.